培养基的配制(培养基制作流程)
培养基的配制
以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外,对维持培养基的渗透压也起重要作用。
但在培养基中用硝态氮的较多,也有将硝态氮和铵态氮混合使用的;磷和硫则常用磷酸盐和*盐来提供。钾是培养基中主要的
提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子,大多以螯合铁的形式存在,即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
组织培养是否成功,在很大程度上取决于对培养基的选择。不同培养基有不同特点,适合于不同的植物种类和接种材料。开展组织培养活动时,应对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择使用。下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表9-1。
在营养上和*上的需要。因此,一般情况下,无须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。与其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的明显特点。
培养基制作流程
在近代的培养基中,其数量有逐渐提高的趋势。钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物,由钙盐、磷酸盐或
和加速愈伤组织的生长十分有利。由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存、消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不致影响离子间的平衡。MS固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖及
椰子汁及各种氨基酸等。另外,琼脂也是最常用的有机附加物,它主要是作为培养基的支持物,使培养基呈固体状态,以利于各种外植体的培养。
可溶性淀粉2g,硝酸钾0.1g,磷酸氢二钾0.05g,氯化钠0.05g,*镁0.05g,*亚铁0.001g,琼脂2g,水100mL。先把淀粉用5ml水调成糊状后,倒入95mL水,搅匀后加入其他药品,使其溶解。煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH为7.2~7.4,分装后灭菌,备用。
取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250g,用刀剁成肉末,加人500ml蒸馏水和5g蛋白胨。煮沸,转文火炖2h,过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液调pH为7。5左右。每支*内加人10ml。肉汤和少量碎肉末,灭菌,备用。
牛肉膏蛋白胨培养基制作步骤
20%马铃薯煮汁1000mL,磷酸二氢钾3g,*镁1.5g,葡萄糖20g,维生素10mg,1脂18g。先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH到6,分装,灭菌,备用。该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
取母液1、2、3、4、5各5mL,取母液6 1mL,加蒸馏水至1000mL,调pH值为8。0.0BG-11固体培养基含琼脂1%
葡萄糖10g,磷酸氢二钾0.05g,碳酸钙3g,*镁0.02g酵母粉0.04g,琼脂20g,水1000ml,1%结晶紫溶液1mL。先把琼脂加水煮沸溶解,再分别加入其他组分,搅拌溶解后,分装,灭菌,备用。
